Solución innovadora para o diagnóstico de tuberculose e DR-TB con #Macro e Micro-Test!

Unha nova arma para o diagnóstico da tuberculose e a detección da resistencia aos fármacos: unha secuenciación dirixida de nova xeración (tNGS) combinada coa aprendizaxe automática para o diagnóstico da hipersensibilidade á tuberculose

Informe bibliográfico: CCa: un modelo de diagnóstico baseado en tNGS e aprendizaxe automática, axeitado para persoas con menos tuberculose bacteriana e meninxite tuberculosa.

Título da tese: Secuenciación de nova xeración dirixida á tuberculose e aprendizaxe automática: unha estratexia diagnóstica ultrasensible para tubulos pulmonares paucíficos e meninxite tubular.

Periódico: 《Clinica Chimica Acta》

SE: 6,5

Data de publicación: xaneiro de 2024

En conxunto coa Universidade da Academia Chinesa de Ciencias e o Hospital Tórax de Pequín da Universidade Médica Capital, Macro & Micro-Test estableceu un modelo de diagnóstico da tuberculose baseado na tecnoloxía de secuenciación dirixida (tNGS) de nova xeración e no método de aprendizaxe automática, que proporcionou unha sensibilidade de detección ultraalta para a tuberculose con poucas bacterias e a meninxite tuberculosa, proporcionou un novo método de diagnóstico de hipersensibilidade para o diagnóstico clínico de dous tipos de tuberculose e axudou ao diagnóstico preciso, á detección da resistencia aos fármacos e ao tratamento da tuberculose. Ao mesmo tempo, comprobouse que o cfDNA plasmático do paciente pódese usar como un tipo de mostra axeitado para a mostraxe clínica no diagnóstico da TBM.

Neste estudo, empregáronse 227 mostras de plasma e de líquido cefalorraquídeo para establecer dúas cohortes clínicas, nas que as mostras da cohorte de diagnóstico de laboratorio se empregaron para establecer o modelo de aprendizaxe automática para o diagnóstico da tuberculose e as mostras da cohorte de diagnóstico clínico se empregaron para verificar o modelo de diagnóstico establecido. Todas as mostras foron primeiro dirixidas a un conxunto de sondas de captura dirixidas especialmente deseñado para Mycobacterium tuberculosis. Despois, baseándose nos datos de secuenciación TB-tNGS, o modelo de árbore de decisión utilízase para realizar unha validación cruzada de 5 veces nos conxuntos de adestramento e validación da cola de diagnóstico de laboratorio, e obtéñense os limiares de diagnóstico das mostras de plasma e das mostras de líquido cefalorraquídeo. O limiar obtido lévase a dous conxuntos de probas da cola de diagnóstico clínico para a detección, e o rendemento diagnóstico do aprendiz avalíase mediante a curva ROC. Finalmente, obtívose o modelo de diagnóstico da tuberculose.

Fig. 1 diagrama esquemático do deseño da investigación

Resultados: Segundo os limiares específicos da mostra de ADN do LCR (AUC = 0,974) e da mostra de cfDNA do plasma (AUC = 0,908) determinados neste estudo, entre 227 mostras, a sensibilidade da mostra de LCR foi do 97,01 %, a especificidade foi do 95,65 % e a sensibilidade e especificidade da mostra de plasma foron do 82,61 % e do 86,36 %. Na análise de 44 mostras emparelladas de cfDNA do plasma e ADN do líquido cefalorraquídeo de pacientes con tuberculose pulmonar, a estratexia diagnóstica deste estudo ten unha alta consistencia do 90,91 % (40/44) no cfDNA do plasma e no ADN do líquido cefalorraquídeo, e a sensibilidade é do 95,45 % (42/44). En nenos con tuberculose pulmonar, a estratexia diagnóstica deste estudo é máis sensible ás mostras de plasma que os resultados de detección Xpert das mostras de zume gástrico dos mesmos pacientes (28,57 % fronte ao 15,38 %).

Fig. 2 Rendemento da análise do modelo de diagnóstico da tuberculose para mostras de poboación

Fig. 3 Resultados diagnósticos de mostras emparelladas

Conclusión: Neste estudo estableceuse un método diagnóstico hipersensible para a tuberculose, que pode proporcionar unha ferramenta de diagnóstico coa maior sensibilidade de detección para pacientes clínicos con tuberculose oligobacilar (cultivo negativo). A detección de tuberculose hipersensible baseada no cfDNA plasmático pode ser un tipo de mostra axeitado para o diagnóstico de tuberculose activa e meninxite tuberculosa (as mostras de plasma son máis fáciles de recoller que o líquido cefalorraquídeo para pacientes con sospeita de tuberculose cerebral).

Ligazón orixinal: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/s0009898123004990? via%3Dihub

Breve introdución dos produtos de detección de tuberculose da serie Macro & Micro-Test

Dada a complexa situación das mostras dos pacientes con tuberculose e as diversas necesidades, Macro & Micro-Test ofrece un conxunto completo de solucións NGS para a extracción por licuefacción de mostras de esputo, a construción e secuenciación da biblioteca Qualcomm e a análise de datos. Os produtos abarcan o diagnóstico rápido de pacientes con tuberculose, a detección de resistencia a fármacos da tuberculose, a tipificación de Mycobacterium tuberculosis e NTM, o diagnóstico de hipersensibilidade de tuberculose sen bacterias e persoas con tuberculose, etc.

Kits de detección seriada de tuberculose e micobacterias:

Nº de artigo nome do produto contido de probas de produtos tipo de mostra modelo aplicable
HWTS-3012 Axente de liberación de mostras Usado no tratamento de licuefacción de mostras de esputo, obtivo un número de récord de primeira clase, Sutong Machinery Equipment 20230047. esputo
HWTS-NGS-P00021 Kit de detección cuantitativa de Qualcomm para tuberculose hipersensible (método de captura de sonda) Detección de hipersensibilidade non invasiva (biopsia líquida) para tuberculose pulmonar e nódulos cerebrais negativos para bacterias; analizáronse as mostras de persoas sospeitosas de estar infectadas con micobacterias tuberculosas ou non tuberculosas mediante metaxenómica de secuenciación de alta profundidade e proporcionouse información de detección de se as micobacterias tuberculosas ou non tuberculosas estaban infectadas e a principal información de resistencia a fármacos de primeira liña de Mycobacterium tuberculosis. Sangue periférico, líquido de lavado alveolar, hidrotórax e ascite, mostra de punción focal, líquido cefalorraquídeo. Segunda xeración
HWTS-NGS-T001 Kit de tipificación de micobacterias e detección de resistencia a fármacos (método de secuenciación de amplificación multiplex) Proba de tipificación de micobacterias, incluíndo MTBC e 187 NTMA detección da resistencia a fármacos de Mycobacterium tuberculosis abrangue 13 fármacos e 16 sitios de mutación principais de xenes de resistencia a fármacos. Esputo, líquido de lavado alveolar, hidrotórax e ascite, mostra de punción focal, líquido cefalorraquídeo. Plataforma dual de segunda/terceira xeración

Destacados: HWTS-NGS-T001 Kit de tipificación de micobacterias e detección de resistencia a fármacos (método de amplificación multiplex)

Introdución do produto

O produto baséase nos principais fármacos de primeira e segunda liña descritos nas directrices de tratamento da tuberculose da OMS, macrólidos e aminoglicósidos que se usan habitualmente nas directrices de tratamento da NTM, e os sitios de resistencia aos fármacos abarcan un grupo de sitios relacionados coa resistencia aos fármacos no catálogo de mutacións do complexo Mycobacterium tuberculosis da OMS, así como outros xenes e sitios de mutación de resistencia aos fármacos reportados segundo a investigación e as estatísticas de literatura de alta puntuación tanto nacional como estranxeira.

A identificación da tipificación baséase nas cepas de NTM resumidas nas directrices de NTM publicadas polo *Chinese Journal of Tuberculosis and Respiratory Diseases* e no consenso dos expertos. Os cebadores de tipificación deseñados poden amplificar, secuenciar e anotar máis de 190 especies de NTM.

Mediante a tecnoloxía de amplificación por PCR multiplex dirixida, amplificáronse os xenes de xenotipificación e os xenes resistentes a fármacos de Mycobacterium mediante PCR multiplex e obtívose a combinación de amplicóns dos xenes diana que se van detectar. Os produtos amplificados pódense construír en bibliotecas de secuenciación de alto rendemento de segunda ou terceira xeración, e todas as plataformas de secuenciación de segunda e terceira xeración pódense someter a unha secuenciación de alta profundidade para obter a información de secuencia dos xenes diana. Ao comparar coas mutacións coñecidas contidas na base de datos de referencia integrada (incluído o catálogo de mutacións do complexo Mycobacterium tuberculosis da OMS e a súa relación coa resistencia aos fármacos), determináronse as mutacións relacionadas coa resistencia aos fármacos ou a susceptibilidade aos fármacos antituberculosos. En combinación coa solución de tratamento de mostras de esputo autoaberta de Macro & Micro-Test, resolveuse o problema da baixa eficiencia de amplificación de ácidos nucleicos das mostras clínicas de esputo (dez veces maior que a dos métodos tradicionais), de xeito que a detección de secuenciación da resistencia aos fármacos pódese aplicar directamente ás mostras clínicas de esputo.

Rango de detección do produto

34xenes relacionados coa resistencia aos fármacos18medicamentos antituberculosos e6Detectáronse drogas NTM, que abarcan297sitios de resistencia a fármacos; Dez tipos de Mycobacterium tuberculosis e máis de190Detectáronse tipos de NTM.

Táboa 1: Información de 18+6 fármacos +190+NTM

Vantaxe do produto

Forte adaptabilidade clínica: as mostras de esputo pódense detectar directamente cun axente de autolicuefacción sen cultivo.

O funcionamento experimental é sinxelo: a primeira rolda de operación de amplificación é sinxela e a construción da biblioteca complétase en 3 horas, o que mellora a eficiencia do traballo.

Tipificación e resistencia aos fármacos completas: cubrindo os sitios de tipificación e resistencia aos fármacos de MTB e NTM, que son os puntos clave de preocupación clínica, tipificación precisa e detección de resistencia aos fármacos, compatible con software de análise independente e xeración de informes de análise cun só clic.

Compatibilidade: compatibilidade do produto, adaptándose ás plataformas ILM e MGI/ONT convencionais.

Especificación do produto

Código do produto nome do produto Plataforma de detección especificacións
HWTS-NGS-T001 Kit de tipificación de micobacterias e detección de resistencia a fármacos (método de amplificación multiplex) ONT、Illumina、MGI、Salus pro 16/96rxn

Data de publicación: 23 de xaneiro de 2024