Xene de resistencia aos carbapenémicos (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP)
Nome do produto
Kit de detección HWTS-OT045 (PCR de fluorescencia) para o xene de resistencia aos carbapenémicos (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP)
Epidemioloxía
Os antibióticos carbapenémicos son antibióticos β-lactámicos atípicos co espectro antibacteriano máis amplo e a maior actividade antibacteriana. Debido á súa estabilidade fronte á β-lactamase e á súa baixa toxicidade, converteuse nun dos fármacos antibacterianos máis importantes para o tratamento de infeccións bacterianas graves. Os carbapenémicos son moi estables fronte ás β-lactamases de espectro amplo mediadas por plásmidos (BLEE), cromosomas e cefalosporinases mediadas por plásmidos (encimas AmpC).
Canle
| Mestura PCR 1 | Mestura para PCR 2 | |
| FAM | IMP | VIM |
| VIC/HEX | Control Interno | Control Interno |
| CY5 | NDM | KPC |
| ROX | OXA48
| OXA23 |
Parámetros técnicos
| Almacenamento | ≤-18 ℃ |
| Vida útil | 12 meses |
| Tipo de mostra | Esputo, colonias puras, frotis rectal |
| Ct | ≤36 |
| CV | ≤5,0% |
| Nivel de detalle | 103UFC/ml |
| Especificidade | a) O kit detecta as referencias negativas estandarizadas da empresa e os resultados cumpren os requisitos das referencias correspondentes. b) Os resultados da proba de reactividade cruzada mostran que este kit non ten reacción cruzada con outros patóxenos respiratorios, como Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Staphylococcus aureus, Klebsiella oxytoca, Haemophilus influenzae, Acinetobacter junii, Acinetobacter haemolyticus, Legionella pneumophila, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Candida albicans, Chlamydia pneumoniae, adenovirus respiratorio, Enterococcus ou mostras que conteñen outros xenes resistentes a fármacos CTX, mecA, SME, SHV, TEM, etc. c) Antiinterferencia: Mucina, minociclina, gentamicina, clindamicina, imipenem, cefoperazona, meropenem, clorhidrato de ciprofloxacino, levofloxacino, ácido clavulánico e roxitromicina foron seleccionados para a proba de interferencia, e os resultados amosan que as substancias interferentes mencionadas anteriormente non teñen ningunha reacción interferente á detección dos xenes de resistencia aos carbapenémicos KPC, NDM, OXA48, OXA23, VIM e IMP. |
| Instrumentos aplicables | Sistemas de PCR en tempo real Applied Biosystems 7500 Sistemas de PCR en tempo real QuantStudio®5 Sistemas de PCR en tempo real SLAN-96P (Hongshi Medical Technology Co., Ltd.) Sistema de PCR en tempo real LightCycler®480 Sistema de detección de PCR en tempo real LineGene 9600 Plus (FQD-96A，HangzhouTecnoloxía biolóxica) Termociclador cuantitativo en tempo real MA-6000 (Suzhou Molarray Co., Ltd.) Sistema de PCR en tempo real BioRad CFX96 Sistema de PCR en tempo real BioRad CFX Opus 96 |
Fluxo de traballo
Opción 1.
Reactivo de extracción recomendado: Kit xeral de ADN/ARN Macro e Micro-Test (HWTS-301)9-50, HWTS-3019-32, HWTS-3019-48, HWTS-3019-96) (que se pode usar co extractor automático de ácidos nucleicos Macro & Micro-Test (HWTS-3006C, HWTS-3006B)) de Jiangsu Macro & Micro-Test Med-Tech Co., Ltd.. Engadir 200 μL de solución salina normal ao precipitado de talo. Os pasos posteriores deben seguir as instrucións para a extracción e o volume de elución recomendado é100 μL.
Opción 2.
Reactivo de extracción recomendado: Reactivo de extracción ou purificación de ácidos nucleicos (YDP302) de Tiangen Biotech (Beijing) Co., Ltd. A extracción debe iniciarse en estrita conformidade co paso 2 das instrucións de uso (engadir 200 μL de tampón GA ao precipitado de talo e axitar ata que o talo estea completamente suspendido). Usar auga libre de RNase/DNase para a elución, e o volume de elución recomendado é de 100 μL.
Opción 3.
Reactivo de extracción recomendado: Reactivo de liberación de mostras Macro & Micro-Test. A mostra de esputo debe lavarse engadindo 1 ml de solución salina normal ao precipitado de talo tratado mencionado anteriormente, centrifugarse a 13000 r/min durante 5 minutos e desbotarse o sobrenadante (conservar entre 10 e 20 µL de sobrenadante). Para colonias puras e hisopo rectal, engadir 50 μL de reactivo de liberación de mostra directamente ao precipitado de talo tratado mencionado anteriormente e extraerse segundo as instrucións de uso.
